三酰甘油氧化聚合甘油的检测、评价及应用

三酰甘油氧化聚合甘油（Oxidized triacylglycerol polymers，TGP）是油脂氧化过程中发生的一类极其复杂的深度氧化产品，在油脂的加工、贮藏、运用过程中TGP总量持续递加，经再次常规精粹也不衰减，是一个可以客观表征油脂氧化程度的内源性目标。本文针对现在油脂氧化目标存在的缺点和高灵敏度TGP测定的规范技能缺失等问题，展开了TGP与油脂氧化关联性及其在油脂质量点评中应用的相关研讨，首要研讨内容如下： 1、TGP的制备型快速柱层析-高效体积排阻色谱检测办法研讨。选用制备型快速柱层析-高效体积排阻色谱（PFC-HPSEC）技能，研讨树立了一种适于检测冷榨油和精粹食用植物油等低含量TGP（小于3%）油脂的检测办法，用中压Flash柱预别离油脂极性组分，经高效体积排阻色谱细分TGO、TGD、ox-TG、DG、FFA等组分，用聚苯乙烯规范相对分子量定性，根据分量法测定油脂极性组分含量及高效体积排阻色谱面积归一法定量油脂中TGO和氧化三酰甘油二聚物（TGD）百分含量，结果表明：TGO和TGD2别离在28-1800mg/L、11-2800mg/L范围内线性关系杰出，相关系数（R）均高于0.99，TGO及TGD的最低检测限别离为28mg/L、11mg/L，定量下限别离为113mg/L、44mg/L；相当于油脂中TGP的最低检测限为0.01%(100μg/g)。制备型快速柱层析的3个极性组分加标水平的均匀回收率为95%-98%。制备型快速柱层析-高效体积排阻色谱检测油脂TGP的重复性RSD均小于10%。制备型快速柱层析-高效体积排阻色谱办法与经典的硅胶柱-高效体积排阻色谱办法在定量油脂TGP的相对误差低于8.9%。 2、TGP与油脂氧化程度关联性研讨。选用高效体积排阻色谱（HPSEC）技能，对食用植物油室温贮藏氧化、Schaal烘箱法加速氧化、高温煎炸氧化等三种油脂氧化过程中发生的极性组分（PCs）及其细分组分进行了比较剖析，一起监测了油脂氧化过程中内源性天然抗氧化剂VE的含量改变，树立TGP与油脂氧化程度关联性，结果表明：氧化三酰甘油（ox-TG）的量与诱导期出现杰出的线性关系。氧化三酰甘油寡聚物（TGO）的出现及内源性天然抗氧化剂VE的耗尽标志诱导期完毕的。TGO基本都是氧化三酰甘油的三聚体，估测首要是含环氧基、酮基、醛基、C-C键桥、C-O-C键桥的甘油酯。ln(TGO/TGO0)与大豆油氧化程度成线性关系。 3、TGP的凝胶浸透色谱色谱制备与稳定性研讨。选用制备型快速柱层析联用高压凝胶浸透色谱技能，从油脂极性组分制备mg量级TGO和TGD，调查了TGP的二聚体和寡聚体在多种物理状态与贮藏条件下的稳定性，用高效体积排阻色谱测定了极性组分各相关组分的分子量，结果表明：高压凝胶浸透色谱制备TGP的优化条件为：选用三级串联凝胶浸透色谱柱标准Waters UltrastyragelTMLinear四氢呋喃柱（19mm×300mm）+Waters UltrastyragelTM500四氢呋喃柱（19mm×300mm）+Waters UltrastyragelTM100四氢呋喃柱（19mm×300mm），上样量500ul，活动相四氢呋喃，流速4.2mL/min，TGO、TGD的搜集时刻别离为29.00-32.10min、32.25-33.50min。以油脂极性组分为质料的高压凝胶浸透色谱制备TGP周期约为1h，单次别离获得0.49mgTGD与0.23mgTGO，纯度均在99%以上，TGD与TGO得率别离为29%和13%。TGD与TGO的凝胶浸透色谱制品适宜在四氢呋喃溶液稳定贮藏，-20℃至20℃各温度条件下60d最大衰减均低于3%，TGP固体即使-20℃保存60d也衰减10%，在25℃室温下运用不应超过6h。极性组分中TGO、TGD、ox-TG、DG的分子量（Mw）别离为2469、1728、908、510，TGO以三聚体为主。 4、TGP的细胞毒性点评。研讨了不同TGP浓度对巨噬细胞Ana-1的作用，选用倒置相差镜调查细胞生长，噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖才能，激光共聚集镜观测细胞凋亡，酶标定量胞外乳酸脱氢酶，流式细胞术检测胞内活性氧（ROS），结果表明：50μg/mL浓度的TGP致细胞显着损伤，该浓度下的巨噬细胞在倒置相差显微镜下存活率显着下降、增殖才能遭到明显抑制、吞噬中性红的才能明显下降、乳酸脱氢酶释放量明显上升，细胞前期凋亡显着。活性氧过度发生是TGP致细胞损伤的首要原因之一。TGD与TGO细胞毒性差异不显着，支撑Billek的油脂TGP低吸收率的定论，尚不能确定与恶性肿瘤相关性。 5、基于TGP的油脂质量点评应用。展开了基于TGP的地沟油检测、冷榨油鉴别和煎炸油质量操控、毛油质量点评等应用研讨。比较剖析食用植物油与地沟油两大样本库的TGP，定论如下：12种常见食用植物油41个样本TGP含量0.69±0.41，3类典型地沟油64个样本TGP含量6.01±3.44，差异极其明显，据此可以一定程度精确鉴别地沟油；冷榨油具低TGP特征可明显差异于精粹油；煎炸油中TGP与PCs线性相关，TGP直接指示煎炸油质量；毛油的TGP反映其新鲜程度。TGP在油脂质量点评中的应用优势，依赖于分类油脂的TGP基础数据库。